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2022-05-24如何设计QPCR引物

2022-05-24如何设计QPCR引物

作者: 麦冬花儿 | 来源:发表于2022-05-25 10:17 被阅读0次

本教程是利用NCBI数据库进行设计。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
第一步:准备所要设计引物的基因序列

第二步:打开blastn选项


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第三步:找到自己研究的物种,点击序列所属的accession


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第四步:点击‘pick primer’
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第五步:选择参数1、选择产物的长度,一般都是70-150. 2、选择引物跨越外显子
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第六步:等待结果



第七步:选择结果,一般选择前两个引物即可。
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当然,也可以使用其他的软件进行qpcr引物设计,但是要进行特异性验证。
验证方法如下:
第一步:打开ncbi的‘primer-blast’程序


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第二步:将前后引物粘贴进去,修改物种


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第三步:看结果
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显然这个引物不行,扩增出来的产物太多。

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