原理
感受态是指受体细胞易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。感受态由受体细胞的遗传性状所决定的，受菌龄、外界环境因子的影响。
Ca2+存在可大大促进转化的作用，新鲜，幼嫩的细胞是选择做感受态细胞的佳材料。
感受态细胞在0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，而转化混合物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羟基--钙磷酸复合物，并粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，可促使细胞迅速收缩，吸收DNA复合物，完成转化。
准备工作
LB液体/固体培养基、DH5a菌株/感受态、0.1M Cacl2 与15% 甘油（灭菌）（配制0.1M Cacl2 与15% 甘油时，若配制50ml，则计算得知需要甘油7.5ml ，Cacl2 0.735g。先加Cacl2与甘油，加完后ddH2O定容至50ml）、灭菌滤纸。
步骤
1.于超净将DH5a菌株划线至LB 固体培养基，37°培养过夜；
2.于超净挑单菌落至5ml LB液体培养基，37°摇床培养过夜；
3.于超净取1ml 菌液转接至50ml LB液体培养基（提前灭菌50ml LB液体培养基＋锥形瓶），37°摇床培养约2-2.5h至OD600=0.5左右（需要在超净中吸取1mlLB对照和1ml 菌液，LB作为blank）；
4.于超净将菌液转至新的50ml离心管，冰浴10min（冰要没过离心管）；
5.离心机预冷，4° 4000rpm，10min 集菌；
6.于超净中弃上清，倒置于灭菌滤纸上1min，待上清液滤干；
7.加入10ml 0.1M Cacl2（提前预冷且灭菌）重悬菌体，轻柔洗吹，冰浴30min；
8.重复离心集菌弃上清，倒置于灭菌滤纸上，待上清液滤干；
9.加入2.5ml 0.1M Cacl2+15%甘油（提前预冷且灭菌）重悬沉淀，轻柔洗吹，分装100 μL 每管至灭菌的1.5ml离心管中，液氮速冻，-80°保存。
注意事项
1.为制备转化效率较高的感受态细胞，可将保菌液经划线和二次培养以后用于制作感受态细胞。
2.注意挑取LB固体培养基上湿润，圆滑的克隆，以防挑取杂菌。
3.制作感受态的过程中尽量冰上操作，操作的动作尽量轻柔，稳健；试验中所用的试剂，转子，离心机需要提前预冷。
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