分离技术

上一章我们学习了接种技术，这一章我们来学习分离技术，接种技术就是把菌种接在斜面或液体上让它增值分化出新鲜的菌落，把它分离纯化是我们这一节主要讲的内容，分离纯化需要在平皿上进行

上一节讲了平皿的分装，我们需要把分装好的平皿先放在培养箱中去除水蒸气，因为它会让菌种在划线外生长，有可能会造成菌种相连就不会出现单个菌落的情况

一般划斜面是用来保存菌种，在斜面上的菌种如果我们需要分离纯化需要把菌种接在液体中制成菌悬液，为什么需要做成菌悬液呢，用斜面上的菌种直接划线分离不好吗？首先如果用斜面上的菌种一个是浓度太高了，有可能划线后还是长成一片无法分离，再一个接在液体培养基里由于与培养基的接触面积变大，菌种会增值分化出很多新鲜的个体，液体里的菌种活力比较高，由于菌种在液体中被稀释了，用接种环挑取3~4环菌悬液时通过划线就有可能分离出单个菌落，也可以根据菌悬液的浓度来选择挑取几环接种

平板划线的方法有两种，一种是针对菌液浓度较高的分段划线法，一种是菌液浓度较低的连续划线分离法

一：分段划线法

灼烧接种环后挑取菌悬液3~4环，左手拿平皿，打开皿盖，在原点处涂抹然后划3~5条线，盖上皿盖，灼烧接种环，再旋转平皿从刚才线的末端开始划3条线，就这样把培养基分成三~四分区，注意每次划线完需要重新灭菌接种环，防止划线时带上上一次划线中残留的菌种，确保每次重新划线时是从线的末端开始接种，当划到第三或第四分区时，要注意不要和第一区的线相交了，因为是从第一区开始划线，菌种浓度最高，当划到第三，第四区的时候菌种浓度最低，就有可能长出单个菌落

在实验室做的限度检查，首先第一步是制备菌悬液，为什么需要制备菌悬液呢，因为药典上规定接种量大概是100cfu左右，制成菌悬液后稀释，稀释完后加入大豆液体中放在霉菌培养箱中培养两小时，培养完需要接在肠道中培养两天，让菌种充分的增殖分化生长，最后是划平板，用的是哪种划法？分段划线法，如果不确定可以做下验证，两种方法都划一遍，做平行和空白对照

二：连续划线法

用灭菌的接种环挑取菌悬液，在起点处涂抹均匀后开始划线，线是连续的z字形，不管是分段划线法还是连续划线法，在平板上的线条应均匀分布在整个培养基平面

三：涂布法

用移液枪吸取稀释好的菌悬液0.1ml加入到培养基的中央，然后用灭菌的涂布器把菌悬液均匀的平铺在培养基上

四：倾注分离法

把经过稀释的菌悬液吸取1ml加入到无菌平皿中，倒入灭菌后冷却至50摄氏度的培养基15ml后摇匀，凝固后倒置培养计数

好了这一节的内容大概就学完了，总结一下，分离法主要是在平皿上进行，把经过稀释的菌悬液按照连续划线法、分段划线法、倾注分离法或涂布法接种在平板上，让平板上生长出单个菌落达到分离效果