近年来,单细胞测序技术越发火爆,它在揭示细胞异质性和展示组织内真实细胞种类上独有优势。单细胞实验从单细胞悬液到单细胞核悬液,从上门样本制备到寄送样本制备,方式已经越来越多样化。对于很多地区来说,可能上门进行样本制备不是特别适用,对此多数都会采取寄送样本的方式进行制备,今天小编就寄送样本过程需要注意的点进行了小小的总结,希望对大家能有所帮助哦!
寄送样本过程中的小小建议:
组织保存液寄送新鲜样本(<48h)
l 组织大小≥0.2 g,常见肿瘤组织优先;
l 客户将新鲜组织样本处理成适宜体积(建议指甲盖大小,去除周边不需要的组织等)后,直接放入装有组织保存液的储存管中。组织尽量无菌放入液体中,迅速盖紧加封口膜包装好。
l 组织样本应完全浸没于组织保存液中(组织保存液用之前需2-8℃预冷);
l 建议首次寄送时同一样本2-3管重复,以防万一;
l 客户需标明:样本名称,组织类型,离体时间,浸入组织保存液时间;
l 冰袋寄送(注意不要选择干冰),装有样本的储存管不能和冰袋直接接触,需用泡沫包裹。务必保证在 48 小时内到达实验室。
注意:组织保存液尽量在1个月内使用,存放在4度冰箱里,不要冻存!
干冰寄送冻存细胞
l 冻存前细胞活性80%以上 ;
l 建议首次寄送时同一样本2-3管重复,以防万一;
l 冻存方法:将分离的细胞放到程序降温盒中(推荐异丙醇冻存盒),然后将程序降温盒放入到-80℃冰箱,24小时后干冰寄送或者液氮保存。可参考10x 官方细胞冻存方法CG00014_Demonstrated_Protocol_FreshFrozenHumanMouseCellLineMix或者CG00039_Demonstrated_Protocol_FreshFrozenHumanPBMCs(10x官网可下载或者联系诺禾销售或技术提供);
l 将液氮保存的细胞冻存管,采用干冰寄送至单细胞实验室;
l 细胞复苏后,若细胞活性≥80%,建议上机 10x/BD;若细胞活性<80%,则不建议上机。
干冰寄送冻存组织抽核
l 客户处理组织样本,一般组织建议 0.2-0.5g/管,处理成黄豆大小,液氮速冻,然后把样本放入装有冻存管中保存,建议后续将冻存管放入冻存盒中。客户需标明:样本名称,组织类型,离体保存时间;
l 冻存后拿出冻存管,采用干冰寄送(一般 10-20 公斤,根据运输季节及距离而定)至实验室(寄送过程中保证干冰充足);
l 如样本量足够,建议首次寄送同一样本 2-3 管重复,以作备用;
l 若是对照课题,建议首次寄送进行预实验,预实验确定项目方案后,再进行珍贵实验组的准备和寄送。预实验建议提供测试样本尽量全面;
l 若组织不是液氮速冻,而是直接放在干冰上或-80°冰箱速冻,组织 RNA 可能会略有降解,影响后续结果。
温馨提示
单细胞悬液的质量很大程度取决于样本本身的状态,制备过程可能会对基因的表达有一定影响,而运输冻存等也会对脆弱细胞有一定损伤,因此不建议做细胞全图谱的老师选择此方式,而对于研究分子机制的老师较为适用。另外样本污染可能会对后续数据质量造成严重影响,一定注意无菌操作。
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