《柑橘体细胞融合创制三倍体无核新种质及融合再生植株的遗传鉴定》张亚莎的研究生毕业论文
该论文的研究主要是围绕想要通过细胞融合的技术获得稳定生长的三倍体愈伤组织，从而再将其诱导成三倍体植株。然而，在这个方面的尝试，本文是失败了的，可谓虽败犹荣。据研究表明，三倍体体细胞杂种的实现方式主要有两种，一是配子（n）——体细胞（2n）融合，二是体细胞（n）——体细胞（2n）融合。
邓秀新教授在1995年用配子（n）——体细胞（2n）融合的方法，用酶解法分离出平户文旦柚的四分体小孢子原生质体，将其与伏令夏橙愈伤组织原生质体融合，利用PEG诱导融合方法获得一些三倍体细胞团、心型胚、及球形胚，但未鉴定遗传物质。他提出，四分体小孢子是减数分裂后的产物，用亲本一方的四分体小孢子与另一体细胞融合后代的遗传变异幅度只取决于一方，所以遗传变异幅度较有性杂交方式要小。然而，体配融合的方法并不方便，柑橘花粉四分体时期较短，一般只有10天左右，而且小孢子原生质体的分离对技术要求高，易出现纯度低、易破裂的问题。
此外通过体细胞（n）——体细胞（2n）融合也有先例，1997年，Kobayashi等利用其中两个单倍体植株分离叶肉原生质体，与二倍体甜橙珠心愈伤组织原生质体电击融合，获得了三倍体，并检测为三倍体体细胞杂种。此外，付春华等（2003）在普通对称融合的过程中也有三倍体植株产生，可能是一组染色体丢失所致，其再生根困难，嫁接在田间伏令夏上，初期正常生长，后期出现落叶，继而整个植株死亡的现象。
1964年，第一例通过花药离体培养获得单倍体成功，从此，通过单倍体与二倍体细胞的体细胞杂交获得细胞融合三倍体植株便成了理想的方式。Pirric及Power（1986）提到，三倍体的形成概率在一定程度上取决于单倍体亲本与二倍体亲本的同源程度。
因此，通过单倍体愈伤组织与二倍体愈伤组织通过细胞融合获得三倍体细胞便成了作者主要研究目的，他使用‘早金’甜橙单倍体愈伤纯系Fa、Ec为亲本之一，以‘默科特’二倍体愈伤为另一亲本。实验结果很遗憾，没有获得三倍体。
除了培育单倍体，四倍体的培育也对柑橘无核化提供材料，作者还对前人培育出的四倍体通过流式细胞仪进行倍性监测以及通过SSR进行亲本鉴定。这些品种的预期是得到转移了温州蜜柑线粒体基因组的二倍体胞质杂种，从而实现地方优良品种的无核改良，经鉴定，都是四倍体植株，并且存在杂合的现象。
网友评论