摘取引自
病毒包装实验(二) - 知乎 (zhihu.com)
慢慢的慢病毒 - 简书 (jianshu.com)
Addgene: Lentivirus Plasmids
Addgene: Lentiviral Guide
目前在分子克隆领域中我们主要接触的慢病毒载体系统就是从人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency viruses,HIV)改造而来的。
为了提高慢病毒的安全性,病毒生产所需的组分被分成多个质粒。慢病毒载体系统一般会包含有:
(1)Transfer/Vertor plasmid:包含我们想要转入的目的基因序列。
转基因序列的两侧是长末端重复(LTR)序列,在病毒转导过程中整合到宿主基因组的是LTRs之间的序列,包括LTRs。基于HIV-1病毒的慢病毒基因转移质粒,出于安全考虑,转移质粒都不能自我复制,并且三代包装质粒在3'LTR中包含一个额外的缺失,使病毒在整合后自我灭活。
(2)Packaging plasmid(s):包装质粒psPAX2,形成核心蛋白
(3)Envelope plasmid:包膜质粒pMD2.G,形成包膜糖蛋白
质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质(RNA),但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒,其同时连有目的基因和报告基因,psPAX2为能表达慢病毒外壳的质粒,其表达产物可通过粘附机制更易穿过细胞膜, pMD2.G为慢病毒的膜蛋白质粒,通过转染试剂进行三质粒共转到靶细胞基因组中,宿主基因组在表达时,随宿主基因转录出的目的基因RNA与psPAX2、pMD2.G基因翻译出的蛋白组装为慢病毒。
病毒进入细胞后,其遗传物质RNA反转录出DNA,该基因再整合到靶细胞的基因组中,完成转染过程,因为质粒DNA只能转录出病毒RNA和表达目的基因却不能表达出病毒的外壳和膜蛋白成分,因此其不能像普通的病毒一样在宿主细胞能反复增殖,故对宿主细胞是无害的并且高效的将目的基因转染到靶细胞基因组中。
- 慢病毒和逆转录病毒有什么区别?
慢病毒是逆转录病毒的一种亚型。从实验角度来看,慢病毒和标准逆转录病毒(γ-逆转录病毒)的主要区别在于慢病毒能够感染非分裂和主动分裂的细胞类型,而标准逆转录病毒只能感染有丝分裂活性的细胞类型。这意味着慢病毒可以比逆转录病毒感染更多种类的细胞
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