分箱结果可以使用 checkM 检查完整性和污染度。
checkM
基于数据库中构建好的单拷贝基因集和进化树,将bin定位到进化树中找到参考物种,基于谱系特异的marker gene(单拷贝),进行完整性和污染度进行评估。
- 数据准备:上一步的分箱结果
参考脚本
# 运行checkM
checkm lineage_wf \
--threads 5 \ # 线程
--tmpdir ./ \ # tmp目录路径
--extension fa \ # 序列文件后缀
bins \ # 输入,分箱结果目录
checkm \ # 输出目录
> checkM.sh.log 2>&1 # 存储日志
分箱结果去冗余
计算资源充足的情况下,可以将所有测序数据一起进行组装,然后分箱。但实际操作中,由于内存限制,一般会分样品或者将生物学重复放在一起进行拼接。这样就会存在多个组装和分箱结果,需要对其中重复的 bin去冗余。这个操作可以使用 dRep 实现。
# 将所有分箱fasta文件存放在bin目录下
# 运行dRep去冗余
dereplicate out_dRep \ # 最小基因组长度,默认50k
--length 50000 \
-comp 75 -con 25 \ #最小的基因组完整度,默认75,最大的基因组污染率,默认25
-g ./bins/*.fasta
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