TIRF 荧光显微镜技术

近些年来 Fish荧光的也开始流行开来。

TIRF为加强显微荧光影像轴向解析度之一种光学技术，此技术最适用于观察贴近盖玻片表面区域之荧光样本，实现荧光显微镜观察细胞膜相关生理作用，及活体外单分子交互作用之研究等。由于此类样本所需观察的z轴范围仅约100 nm厚，即易受离盖玻片表面较远区域所产生之荧光讯号干扰，影响观察范围的影像清晰度。

TIRF 荧光显微镜利用物理光学全内反射原理，使用可调整入射角度之雷射光源，配合高孔径值之物镜，使雷射光由物镜入射至样本时，在盖玻片与样本介质(主要为水溶液)之交界面，产生光学全内反射现象。此现象使光源不至于穿透交界面而激发整体样本，只有距盖玻片表面厚度不到200 nm的范围内之区域为受激发范围，且受激强度随着与盖玻片表面之距离呈等比级数下降。因受激发的范围大量减少，此技术可避免非焦面之样本产生发散荧光，故能解决非焦面荧光杂光之问题，达到光学切片之清晰化效果。

荧光显微镜TIRF技术研发由来已久，早在1981即有第一篇相关论文发表。经多年发展，在雷射导引光路设计、雷射角度调整、物镜NA值、适用之浸油及盖玻片等各方面均不断改良。