MRM/PRM定量分析是通过选择目标蛋白质的定量代表性肽段,让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集,从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。利用该技术既可实现样品中靶标物质的相对定量,又可通过合成同位素标准肽段,绘制标准曲线,实现蛋白质的绝对定量。百泰派克公司采用AB SCIEX TripleTOF 5600,AB SCIEX Triple Quad™ 5500,Q Exactive, Fusion质谱平台结合Nano-LC,提供MRM/PRM靶向定量蛋白组分析服务技术服务。
MRM是一项经典的靶向蛋白质组检测技术,也是靶向蛋白组的金标准。MRM首先锁定某蛋白的一个母离子及其一个子离子,后续依赖三重四级杆质谱对离子对(母离子/子离子)进行采集。PRM作为MRM衍生的一种技术,是一种基于高分辨、高精度质谱的靶向定量技术,能够对目标蛋白质/肽段(及含有修饰的肽段)进行选择性检测。
MRM/PRM定量蛋白组学分析实验流程(图片来源:百泰派克生物biotech-pack.com)PRM技术特点
• 离子全扫描,无需选择离子对,节约实验设计和操作时间;
• 可根据需要选择是否加入合成的标准肽段,节约实验成本;
• 选择性更高,重现性更好,在复杂样品中的抗干扰能力更强;
• 线性检测范围,可达5-6个数量级;
PRM技术应用领域
• 定量蛋白质组学(iTRAQ、label-free、SILAC)后,目标蛋白验证
• 蛋白质和肽(包括修饰)的绝对定量
• 疾病标志物的验证
MRM技术特点
• 灵敏度高,经过两级质谱选择与目标离子一致的离子,排除干扰离子,极大提升信噪比,提高检测目标离子的准确度
• 通量高,一次性可以鉴定多达200多个蛋白
• 可以进行绝对定量分析,无需依赖抗体
• 高精准度鉴定低丰度蛋白,定量范围跨4个数量级
MRM技术应用领域
• 对Label-free等非靶向蛋白组研究结果验证
• 对多个蛋白质/肽段同时进行绝对定量研究
• 研究同源度较高,但缺乏特异识别抗体的蛋白家族变化
• 蛋白翻译后修饰定量研究
• 生物疾病靶标绝对定量研究
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