酵母单杂交

酵母单杂交(yeast one hybrid)是在酵母双杂交的基础上发展起来的技术，主要用于研究蛋白质和DNA元件之间的相互作用。

真核生物基因的转录起始需转录因子参与。转录因子通常由一个DNA特异性结合功能域和一个或多个其他调控蛋白相互作用的激活功能域组成，即DNA结合结构域(DNA-bindingdomain，BD)和转录激活结构域(activationdomain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可将GAL4的DNA结合结构域置换为转录因子编码基因，将顺式作用元件与基本启动子 (minimal promoter , Pmin)和报道基因连接。只要转录因子能与目的DNA元件相互作用，即可通过转录激活结构域激活RNA聚合酶，启动下游报告基因的转录。

这是比较官方的说法，更通俗一些来说就是：将我们的调控序列克隆到一个能表达抗性基因的上游（AbAr），做为"bait“；然后将可能含有可能与之互作的蛋白的cDNA文库（一般是，某细胞或组织的RNA构建的cDNA文库）构建到prey质粒上，在这个prey质粒上 cDNA能和GAL4 AD（来自酵母的转录因子GAL4的转录激活结构域）融合表达。如果某蛋白能和我们构建的bait质粒上的我们的调控序列相互作用，那么就将GAL4AD拉到了启动子的位置，这样就激活了抗性基因的转录。将构建的文库prey质粒和bait质粒共转染酵母细胞的时候，在抗生素的平板上能生存下来的克隆里面含有的prey质粒，就表达了能和我们的调控序列互作的蛋白。

原理示意图