ctDNA 定义

早在1948年，研究人员就发现我们细胞内的DNA并不是都待在我们的细胞核内，这些DNA也会游离到血液中来，这些在血液中的DNA就被我们称之为cfDNA 。但是正常细胞和肿瘤细胞是不一样的，我们把来自于肿瘤的cf DNA用另一个名称替代，那就是ctDNA。ctDNA全称为circulating-tumor DNA，是指人血液中肿瘤细胞体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统，故被称为循环肿瘤DNA

ctDNA 来源

ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变，不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。它主要由以下三部分组成：

1. 来源于坏死的肿瘤细胞。

2. 来自于凋亡的肿瘤细胞。

3. 来自于肿瘤细胞分泌的外排体。

4. 循环肿瘤细胞释放的部分ctDNA。

ctDNA 分离方法

目前常用于分离ctDNA的方法有离心柱法和磁珠法。

1、离心柱法：原理是带负电的DNA骨架与带正电的硅胶滤膜之间有高亲和力。钠离子起到阳离子桥的作用，它可以吸引核酸磷酸骨架里带负电荷的氧。在高盐条件（pH≦7）下，钠离子可破坏水中的氢与硅中带负电荷的氧之间的氢键。通过多次漂洗去掉杂质后，用TE或灭菌水洗脱纯化的DNA。

优缺点：成本较低，实验时长相对较长，不能进行自动化处理。

2、磁珠法：带有磁荷的颗粒可用表面包被活性基团的氧化铁颗粒制成，这些活性基团可特异性吸附核酸。因表面积大，结合核酸的能力较强，可作为较好的分离载体。如果赋予容器侧壁磁性，样品混合物中结合有核酸的磁珠则聚集到容器壁，直接倾倒容器可将其他杂质去除，避免了反复离心。磁珠分离技术是现今核酸纯化的一种简单快速的方法。

优缺点：成本较高，实验时长相对较短，可用自动化仪器进行提取。

ctDNA 检测意义

虽然ctDNA技术还属于新兴技术，但是，检测和识别血液中ctDNA携带的肿瘤信息，确实有助于指导癌症的治疗。在某些患者中，可以通过这些漂浮在血液中的ctDNA片段来诊断、监测、以至鉴定潜在的肿瘤治疗靶点。

ctDNA 检测方法

在血液中找出肿瘤细胞来源的DNA片段，然后加以检查和识别。癌细胞具有自我更新的能力，其死亡和新生同时都在发生，因此DNA的释放也是一个动态的过程。随着肿瘤的进行性生长，血液中ctDNA的含量可能会逐渐增高。

由于ctDNA的质量和数量变化大, 因此需要高特异性和高灵敏度的检测方法。目前常用的方法有数字PCR、BEAMing、高通量测序、ARMS等。

ctDNA 临床意义及应用

1、可以减少病人的开刀痛苦，只要抽血，不必开刀，就可以做检，所以可以应用于肿瘤病人的病情随访，并可以多次取样。

2、可以增加可检测的病人范围，对于不适合做开刀手术的病人。例如，已经发生肿瘤全身转移的病人。也可以用测ctDNA的方法来测肿瘤的基因突变。

应用：ctDNA含有与其来源肿瘤DNA同样的基因缺陷，包括突变，缺少，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等；其在血液中的半衰期短，可实时反映肿瘤的动态变化;作为液体活检的一种，可抑制组织活检中由于肿瘤异质性带来的缺陷，检测更全面,因此ctDNA的检测可用于癌症早期诊断与癌症分期、肿瘤的疗效评估、复发监测和预后判断等。

魏祎 | 文案

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