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DamID-seq(DNA 腺嘌呤甲基转移酶鉴定)

DamID-seq(DNA 腺嘌呤甲基转移酶鉴定)

作者: 可能性之兽 | 来源:发表于2022-12-08 18:28 被阅读0次

DNA 腺嘌呤甲基转移酶鉴定(通常简称为 DamID)是一种分子生物学方案,用于绘制真核生物中 DNA 和染色质结合蛋白的结合位点。DamID 通过将提出的 DNA 结合蛋白表达为与 DNA甲基转移酶的融合蛋白来识别结合位点。感兴趣的蛋白质与脱氧核糖核酸的结合使甲基转移酶定位在结合位点的区域。Adenine 甲基化在真核生物中不会自然发生,因此可以推断任何区域的腺嘌呤甲基化都是由融合蛋白引起的,这意味着该区域位于结合位点附近。DamID 是 ChIP-on-chip 或 ChIP-seq 的替代方法.

但DamID 相对于 ChIP seq 的一个主要优势是,蛋白质结合位点的分析可以在体内的特定细胞类型中进行测定,而不需要对细胞亚群进行物理分离。这使得研究动物模型的发育或生理过程成为可能。此外,该技术不需要经过验证的抗体、沉淀步骤或化学交联,并且可以用于最少数量的细胞。

缺点就是虽然这项技术最初是在近二十年前在果蝇中开发出来的,但由于技术限制,只有少数使用哺乳动物细胞的实验成功了。

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Identification of in vivo DNA targets of chromatin proteins using tethered Dam methyltransferase | Nature Biotechnology

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