胚胎显微注射

（一）原理

显微注射技术是当前生命科学领域应用广泛的实用型技术，主要应用于微生物学、医学、昆虫学等研究领域。整个系统由体视显微镜、注射泵、操作臂等部件组成，在高倍显微视野下，通过毛细管注射针将特定物质（如dsRNA等）注入动植物、微生物内，典型地如昆虫的成若虫、胚胎注射。

胚胎显微注射是目前用于昆虫基因遗传改造的最有效的成分输送方法，因其实验流程长、操作要领多，成功的注射往往依赖于对操作细节的掌控，以及不断地经验累积。

（二）设备、试剂、材料需要注意的操作细节

1. 仪器设备

解剖显微镜、显微注射系统（体视显微镜、注射泵、全自动或机械操作臂）

2. 试剂

次氯酸钠溶液，0.02% TritonX-100，卤烃油

3. 材料

毛细管注射针，双面胶，盖玻片，蜡笔，毛笔，黑滤纸，橘小实蝇胚胎

（三）操作步骤

1．将香蕉置于侧面扎有空洞的诱卵杯中，放置在产卵盛期的种群中诱卵15-30 min，取出并用ddH₂O冲洗胚胎，之后用纱网过滤收集;

2. 胚胎用1.2%的次氯酸钠溶液浸泡1 min以去除卵壳，用ddH2O润洗，然后再用0.02% TritonX-100润洗；

3. 将橘小实蝇胚胎固定于注射专用双面胶上，室温晾置10-15 min；

4. 待卵干燥状态适宜后在胚胎上覆盖一层卤烃油( Halocarbon oil) 以便胚胎保湿;

5. 利用Trans2K显微注射系统(Eppendorf, Germany)将提前配制好的物质注射入橘小实蝇的胚胎中；

6. 将注射完成后的胚胎置入通透的保鲜盒内并充氧气(每6h充氧一次)， 将保鲜盒放入28 C恒温培养箱中培养至幼虫孵化;

7. 40h之后，在体视显微镜下观察幼虫的孵化情况，用细毛笔小心挑出幼虫并放置到香蕉上饲养

注射角度