PSC101质粒
psc101 original of replation
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PSC101是一种具有独特复制特性的质粒。它属于低拷贝型质粒,这意味着在每个细胞中,PSC101只复制少数几次,这有助于保持质粒的稳定性,并减少细胞毒性。
PSC101质粒的主要特点是其复制控制。它具有一个独特的复制起点,可以确保其在每个细胞分裂周期中只复制一次。这种精确的控制是通过一种称为"温度敏感"的机制实现的。
在较低的温度下,PSC101的复制被抑制,而在较高的温度下,复制则被激活。这种复制控制机制使得研究人员能够在特定条件下控制质粒的复制,从而更好地研究其功能和应用。
此外,PSC101质粒具有多种应用价值。由于其低拷贝特性,它可以用于在细菌细胞中表达低水平的外源基因。这使得PSC101成为研究基因功能、蛋白质表达和药物筛选等领域的理想选择。同时,由于其温度敏感的复制控制机制,PSC101还可以用于构建温度敏感型的突变体库,以用于研究基因突变和蛋白质功能等课题。
pSC101复制子是低拷贝的,依赖Rep101复制蛋白,这个复制蛋白是温敏型的,所以pSC101复制子是温敏型复制子,在30℃时可以复制,37℃时基本无法复制,使用pSC101复制子是为了方便sgRNA质粒的去除。
psc101是一种什么型复制的质粒
PSC101质粒-温敏型
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p15a
质粒通过 p15A 复制子启动复制,可以与许多原核 表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带 lacI 基因,可高效表达 LacI 抑制蛋白,在 IPTG 诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。
携带 pMB1 和 ColE1 复制子的质粒不相容,但它们与携带 p15A 复制子的质粒 (pACYC177, pACYC184) 完全相容。
根据质粒的不相容性,可分为不相容性和相容性。一个微生物可以容纳不同类型的质粒,但不同的质粒只有在相容的情况下才能存在于一个细菌细胞中。如果两个质粒不相容,其中一个或另一个会迅速从细胞中消失。
质粒复制子兼容性指不同质粒复制子之间的相容性。如果两个质粒的复制子相互兼容,它们可以共存于同一个细胞中,并且每个质粒都可以独立地进行复制。相反,如果两个质粒的复制子不兼容,它们不能共存于同一个细胞中,或者只有一个质粒能够进行复制。
“利用同一复制系统的两个质粒会在复制和随后向自细胞的分配过程中彼此竞争,这样的质粒在细菌培养物中不能和平共处,这种现象称之为不相容性”。
pCDFDuet-1载体
image.pngThe vector also carries the CloDF13-derived CDF replicon, lacI gene and streptomycin/spectinomycin resistance gene (SmR).
J23119 ori
Parts J23100到J23119,是从一个小的组合库中分离出来的组成性启动子家族。这一组共有19个启动子,由John Anderson (来自iGEM2006_Berkeley)设计。它们具有不同的强度,J23119是“consensus”启动子序列,是家族中最强的成员。这些启动子可用于调节组成表达部分的表达水平,可以利用它们来测试不同启动子下目的基因的表达量,从而在其中选择最适合的启动子;
PBAD启动子
PBAD启动子在没有L-阿拉伯糖的情况下,转录调节因子AraC与远端I1和O2半位点结合形成DNA环,在空间上阻断RNA聚合酶与启动子PBAD的结合,在L-阿拉伯糖存在的情况下,与L-阿拉伯糖结合的ArcC构象发生变化,与I1和I2半位点结合招募RNA聚合酶从而激活启动子PBAD。
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