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0 代谢组——HPLC-TOF-MS之定量分析

0 代谢组——HPLC-TOF-MS之定量分析

作者: 一加一共二 | 来源:发表于2021-10-21 21:55 被阅读0次

写在之前:
液质之间也不尽相同,有TOF、三重四极杆等,其中,TOF有着“高分辨,低精密”的特征,一般用于定性;三重四极杆有着“低分辨,高精密”的特点,一般用于定量。
但根据实验目的的不同,TOF也可以进行不同组之间的成分含量高低的的比较,因此,本篇文章整理TOF的定量分析。

样品提取:
1、样品提取尽量减少步骤,减少提取过程导致的样品之间的差异。
2、同一批检测样品的提取,必须同样的时间进行提取,不可以今天提取一部分,第二天再提取另外一部分。

标品的制备(如果有目标成分,用标品,如果没有,也可以):
1、标品可以用样品提取溶剂提取,也可以用DMSO等溶剂进行提取。
2、标品制备成高浓度的母液,进行保存。
3、当制备混标时,如果存在同分异构体,需要根据其成分的分子量,将其分成不同的组别;如果不分成差异组,需要确定相同分子量的成分不在相同的时间点出峰。

进样前准备:
1、确定标准品的化学式,根据样品在正负检测模式下的加合离子,计算标准品的m/z的信息。
2、稀释标准品,仪器的灵敏度以及化合物的响应不同,配置的浓度也不同,一般是10ng左右,在进样时仍旧需要摸索。

条件摸索:
1、先进空白组,确保柱子、仪器是干净的。
2、进标准品,
①、根据计算的m/z的信息,确定仪器检测的精确性;
②、根据响应值,确定标品的浓度是否合适,一般e的6~7次方左右;
③、记录不同化合物的出峰时间。
3、进样品,
①、根据标准品的出峰时间,确定样品中目标成分的峰是否重叠,是否有好的分离度;
②、确定样品或者标准品的制备的浓度是否合适;

4、仪器稳定性的确定:

QC样品的制备:
将制备的所有样品,取相同的体积进行混合均匀。

1、先进空白组,确保柱子、仪器是干净的。
2、进标准品,①、根据计算的m/z的信息,确定仪器检测的精确性;②、根据响应值,确定标品的浓度是否合适,一般e的6~7次方左右;③、记录不同化合物的出峰时间。
3、进QC样品,①、根据标准品的出峰时间,确定样品中目标成分的峰是否重叠,是否有好的分离度;②、确定样品或者标准品的制备的浓度是否合适。
4、仪器稳定性的确定:

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