文献学习057--[Nets]Neutrophil inhibi

1. In VM, neutrophil recruitment and NET production peak during the acute phase

作者取了Sham, d4, d7, d14这几个时间点，发现外周血nets4天就已经很高了，到d14也仍存在。心脏nets的形成在d7的时候最多。

2. Early neutrophil depletion decreases cardiac monocyte recruitment and pro-inflammatory macrophage differentiation, improving VM-induced cardiac necrosis

随后作者使用Ly6G的抗体对中性粒细胞进行了清除
首先使用的是-1d, 1d和4d早期给抗体清除，在d7进行了检测。早期中性粒清楚之后，d7小鼠心脏的坏死(B)和炎症浸润(C)都出现了明显减轻。
随后作者使用流式检测了早期清除中性粒之后心脏血液骨髓的免疫细胞比例变化

⚠️⚠️流式panel（心脏、血液、骨髓）⚠️⚠️

D图显示清除中性粒之后，单核细胞比例下降，巨噬细胞比例变化不明显，和E, G的统计结果一致。F和H图展示了单核和巨噬细胞中促炎性Ly6C^high亚群的比例，结果显示巨噬细胞的促炎性亚群在早期清除中性粒之后出现了下降。
I-K图显示早期清除中性粒还显著降低了血浆多种趋化因子的水平。

3. Neutrophil depletion after the acute phase does not improve VM-induced cardiac necrosis

随后作者还在d7, d11给Ly6G抗体(晚期)清除中性粒，在d14进行检测。发现晚期清除中性粒没有改善小鼠心肌细胞坏死和炎症浸润，而且E图还显示，晚期清除中性粒之后，心脏单核细胞出现了增加。
These data indicate that detrimental chemotaxis between neutrophils and monocytes is temporally restricted to the early acute phase of the inflammatory response during VM.

4. Genetic NET ablation reduces inflammation during acute VM and cardiac macrophage presence

随后作者通过MRP8-Cre-ires/GFP x PAD4^fl/fl 构建了中性粒细胞特异性PAD4敲除鼠(PAD4 Ne-KO)。

MRP8-Cre-ires/GFP小鼠：

PAD4^fl/fl小鼠：
肽基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）在组蛋白H3中将精氨酸转化为瓜氨酸，促进瓜氨酸化组蛋白形成。NETs形成是PAD4依赖的，中性粒细胞能够表达高水平的 PAD4，通过瓜氨酸化调控途径启动 NETosis 及后续反应。抑制PAD4的活性可减少NETs形成。

中性粒细胞特异性NETs缺陷小鼠在造模后d7出现了心脏单核细胞的比例下降。中性粒细胞活化分子CXCL1，单核巨噬细胞活化分子CCL2 和 CXCL10在血浆中出现显著下降。

作者也在d14的时间点进行了检测，心脏坏死和炎症浸润都减轻，d14心脏巨噬细胞比例出现显著下降。

n summary, these results suggest that PAD4-dependent NETs are detrimental during the progression of CVB3-induced VM and that their presence is critical for monocyte/macrophage behaviour.