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技巧(1)——利用SnapGene构建载体,模拟基因克隆,酶切,

技巧(1)——利用SnapGene构建载体,模拟基因克隆,酶切,

作者: 今日之森 | 来源:发表于2021-04-06 13:05 被阅读0次

    做实验嘛,时间和精力的合理分配很重要,利用有限的时间高效完成各项实验的准备工作就显得尤其必要。毕竟需要把更多的时间花在研究文献上面,然后仔细验证实验思路,最后快快的做实验。

    【进入正题】

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    1、主题

    利用SnapGene进行各类载体的构建,并模拟目的基因的扩增,载体的酶切,连接,电泳检测。

    2、示例(以下涉及到的载体和序列是随便选取的,只为演示,不具备实际的意义)

    下面就以pET-32a(+)和拟南芥hsp20基因AT3G46230为例进行演示。

    第一步:打开SnapGene,并打开以上两个文件。

    第二步:针对AT3G46230,设计选取扩增引物。这里的酶切位点就随便选取BamHI和BglII。

    同样的操作,对下游引物进行选取。

    这里没有加保护碱基/同源臂

    第三步:对目的基因进行扩增

    扩增完成。

    第四步:插入目的基因。

    到这一步发现有点问题,刚才随便选的两个酶切位点中的BamHI是不可用的,是因为我们的目的基因中含有BamHI酶切位点的序列。因此,通过检查后,将上面提到的BamHI替换为SalI。并对引物等进行了更新。由于重新更改和截图比较费劲,就不对上面的图片进行更改了。大家明白就行。

    下面接着继续。

    下面就是融合了目的基因的质粒,可以看到目的基因已经成功插入。

    第五步:电泳检测

    比如,这里我们对插入的目的基因进行电泳检测。

    最后,保存质粒图片,或者保存为SnapGene文件,以便日后再编辑。

    结束。

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