(1)选取合适大小的外植体:切取茎尖越小越好,但太小不易成活,过大又不能保证完全去除病毒,因此选取合适大小的外植体剪取茎尖。
(2)酒精处理: 倒入70%酒精,处理茎尖1min,之后倒去酒精。
(3)消毒液处理:倒入消毒液处理15min之后,倒去消毒液。
(4)无菌水处理:无菌水冲洗五次。
(5)滤纸吸干水分。
(6)剥离茎尖:解剖镜之下,微茎尖剥离脱毒。剥离茎尖时,应动作迅速,以免下一步接种时,茎尖变硬。
(7)接种:将剥离之后的茎尖接种在培养基上。
(8)脱分化:在一定的条件之下,微茎尖在培养基上被诱导脱分化,形成愈伤组织。
(9)再分化:选取一定的愈伤组织进行再分化,形成植株。
(10)脱毒苗的鉴定:在一定的条件之下,嗯,微茎尖培养产生的植株不一定都是脱毒苗,因此需要进行脱毒苗的鉴定。
(11)脱毒苗的移栽。
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