在进行测序之前,需要制备测序文库,这其中就涉及到了一些名词,了解这些名词对于后面的数据分析还是有帮助的,下面我就列出我知道的一些
index,adapter,barcode,tile,flowcell,lane,full Y-adapter
此外,还应该知道adapter是如何加上去的,以及如何起作用的
我的理解:简单来说就是提取基因组DNA后,用超声波打断或酶切打断,然后跑胶得到300-500bp的小片段,因为打断是随机打断的,可能有粘性末端,所以用酶来形成平末端,再在平末端后面加上A碱基得到粘性末端,在加上adapter,加到flowcell上,进行几轮的PCR扩增,就得到了测序文库(当然,这其中还包括了很多的反应和步骤)。adapter包括了三部分依次是与flowcell上结合的oligo,区分样品的index,测序需要的引物premer
在测序时,首先是测序引物和序列结合,然后进行边合成边测序(连上一个碱基,测一次,然后进行化学反应,再连碱基,再测序,这样循环下去),测够长度后,将合成的序列去掉,然后加上另外一个premer来测index,这样每个reads都有一个index(用来识别样品来源),然后在进行一次桥式PCR扩增,去掉已经测过序的那条链,再进行一次测序。
有一点需要注意的是,当插入的序列(也就是超声波打断的小片段)如果比较短的话,就可能测到premer和index,当然这种情况比较少见,所以得到数据后,要进行去cutadapter。
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