常用叶绿素提取试剂:丙酮、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)
提取方法:研磨、浸泡
丙酮法测定叶绿素含量
乙醇:丙酮:H2O = 4.5:4.5:1 (体积比)
提取方法对比:
常规方法是研磨提取
改进方法是浸泡提取
提取注意事项:
- 整个过程尽量避光操作
- 称量样品要快速准确0.1g
- 每个样品三个技术重复,每个实验三个生物学重复。
实验步骤:
1.配置buffer提取液,乙醇:丙酮:水=4.5:4.5:1
2.取2.0ml的离心管,加入准确称量后剪碎的样品,加入2.0mlbuffer. - 封口膜封口,4℃过夜(12h) 避光保存。待叶片变白色后。即完成抽提。若提取液体浑浊,可短暂离心后,再测吸光度。
- 使用buffer作为空白对照,测量吸光度。A663 A645
叶绿素a = (12.72A663-2.59A645) × v/w × 1,000
叶绿素b = (22.88A645-4.67A663) × v/w × 1,000
叶绿素总含量 = (20.29A645+8.05A663) × v/w × 1,000
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