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人输尿管上皮永生化细胞(SV-HUC-1)培养要点

人输尿管上皮永生化细胞(SV-HUC-1)培养要点

作者: HyCyte海星 | 来源:发表于2023-11-22 18:03 被阅读0次

SV-HUC-1 (人输尿管上皮永生化细胞),是由猿猴空泡病毒40转染至1名11岁男孩的泌尿道上皮细胞,而建立起来的永生化细胞系。其分化特性与正常细胞相似,培养简单,可无限传代。

SV-HUC-1细胞是正常输尿管组织用SV40病毒转染建株的。反复用非洲绿猴肾细胞平板测试检测传染性SV40的生成,结果都呈阴性;SV-HUC-1细胞在胁迫(如曝露于化学试剂)下可能激活病毒。

细胞名称:人输尿管上皮永生化细胞(STR鉴定正确)

细胞别名:HUC-1; SV-HUC; SVHUC

产品货号:TCH-C341

种属来源:人

组织来源:输尿管

细胞形态:上皮细胞样

生长特性:贴壁生长

培养体系:Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S

配套培养基货号:TCH-G341

传代比例:1:3-1:4,每2-3天换液一次

传代周期:24-48 h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

SV-HUC-1细胞

培养传代

1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃;

2. 用PBS冲洗细胞(每10cm²培养表面积约2mL 溶液)。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后轻柔摇晃容器数次;

从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入0.25%胰酶(试剂量应足以覆盖细胞层);

3. 轻轻摇晃容器,使试剂完全覆盖细胞层,T25 细胞培养瓶留 200 μL左右即可;

4. 将培养容器放在培养箱中孵育5分钟左右,在显微镜下观察细胞解离情况;

5. 当细胞解离程度≥ 90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽,加入所用胰酶两倍体积的完全培养基,吹打细胞层表面数次,使培养基分散;

6. 将细胞转移到无菌离心管中,以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟;

7. 用最少体积的完全培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,再将细胞放回培养箱。

SV-HUC-1细胞培养注意事项

1.该细胞密度越高越难消化,细胞汇合度高于80%时,即可进行传代培养,一般0.25%胰酶消化3-5min。

2. 当细胞难以消化时,可通过延长消化时间或分次消化。

3. 分次消化步骤,弃去旧培养液,加入1mL左右预热的PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞2次,吸出PBS丢弃;加入1mL左右胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;放入培养箱消化,消化3-5分钟(根据具体细胞稍作延长或缩短),显微镜下看到细胞开始漂浮,可以加入2mLPBS,晃动培养瓶使细胞悬浮,不要吹打剩下的贴壁细胞;吸出培养瓶内的PBS和细胞悬液,转移到无菌离心管中,在离心管中加入3mL含血清的培养基终止消化并吹散细胞,使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液;原培养瓶中加入0.5mL胰酶,晃动培养瓶浸润细胞,放入培养箱继续消化,直到细胞块中间全部收缩变圆,晃动培养瓶可脱落;用3mL含血清的培养基终止消化,将瓶底的细胞全部吹下,并轻轻吹吸分散细胞呈单颗;收集细胞悬液与第一次消化下来的细胞合并到一个离心管。第一次消化可在显微镜下观察,待消化70%-80%细胞收缩变圆,轻拍培养瓶侧边,细胞可以滑落方可终止消化。

4. 血清质量差异可能引起细胞状态变化建议选用高质量胎牛血清。

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