1

取已冻干粪便，研磨破碎后加入乙醇，研磨后超声，经离心后，取上清液移入收集管，然后用乙醇超声提取一遍，再用异丙醇提取残留的胆汁酸，合并三次提取的上清液于收集管中冷冻干燥。冻干后用乙腈水溶液复溶，经过滤后进行液相色谱质谱联用仪器分析。

2

公司靶向代谢组学前处理：
1）取液体样本50 μL，加入200 μL含适量内标的甲醇匀浆，2500 r/min 震荡10 min，将震荡后的样本放入-20℃冰箱，放置10 min；
2）12000 r/min离心10 min，离心完后取上清液，放入浓缩仪中浓缩；
3）浓缩完成后用100 μL 50%甲醇水复溶，待LC-MS/MS上机。
文献
使用90μL血浆提取BA。向样品中添加900μL乙腈进行蛋白质沉淀。样品在室温下在振动台上培养1小时，然后在12000g下旋转10分钟；收集上清液并在快速真空中干燥。
干燥样品在400μL 50%甲醇复溶，通过0.22μm Costar Spin-X离心管过滤，并用于分析。

3

称取粪便样本 30mg，加入 200μL 预冷超纯水进行 MP 匀浆处理，加入 1000μL 预冷
甲醇及 10μL 内标，涡旋混合，-20℃孵育 20min 沉淀蛋白；4℃条件下，14000rcf 离
心 15 min，取上清真空干燥；质谱检测时加入甲醇-水（1:1，v/v）复溶，4℃条件下，
14000rcf 离 15min，取上清进样分析。
1.3.4.2 小鼠粪便中TBA含量的测定

4

将采集的小鼠粪便进行真空冷冻干燥，去除粪便中水分。取20 mg干燥后的小鼠粪便，加入1 mL叔丁醇溶液（体积比1∶100），涡旋混匀，37 ℃水浴15 min后涡旋混匀10 s，最后在4 ℃、10 000×g离心2 min取上清液。按照TBA试剂盒说明书测定上清液中TBA含量。

5

将冷冻干燥后的粪便粉碎后，取粪便100 mg，加入10 mL蒸馏水后匀浆，加甲醇８ mL，然后超声 1 h，取出，至提取液冷却至室温后，于常温下离心10 min，转速为5000 r/min，然后取上清液用于TBA含量的测定。