一个明星想要爆红，需要团队来炒作。论文的发表其实也可以看成作者“炒作”的过程，有的人“炒作”自己的新颖的观点，有的人“炒作”自己的缜密的逻辑，有的人则是“炒作”一个概念，将这个概念辗转腾挪就会有新的发现，能够发多好的文章就要看故事怎么样了，也就是团队炒作的实力。
话不多说，今天这篇文章是最新发表在Nature上的一篇letter。
文章题目
文章的作者是一个大牛，名字叫做Axel Ullrich，大家注意这个人名字的发音，德国人的发音还是有所不同的。
作者介绍
看这个简介好像看不出来什么，他参与研发了靶向Her2的药物赫赛汀，开了五家公司，其中不乏被大公司收购，率先克隆出了EGFR，发现了PDGFR和VEGFR信号通路，2006年获得了华伦阿尔波特奖，这个奖主要奖励转化医学做出贡献的人，去年这个奖颁给了屠呦呦。
背景知识
1、FGFR4 基因在染色体的位置为5q35.1，长度为11.3kb，有18个外显子长度为71-600bp。本文中提到的非同义突变rs351855碱基转换的位置为1162位，为编码FGFR4蛋白第388个氨基酸密码子的第一个碱基，表现为C/T转换，密码子有GGG转化为AGG，在FGFR4蛋白合成过程中第388位氨基酸有甘氨酸（Gly）转变为精氨酸（Arg）,其388位氨基酸位于RTK结构高度保守的跨膜区内。
图 1
2、文中涉及到的基因和蛋白。
（1）BiP/GRP78: endoplasmic reticulum chaperone. BiP/GRP78 is normally upregulated during improper folding of membrane proteins.
（2）Sulfo-tyrosine: tyrosine-sulfated proteins , Golgi specific marker.
（3）Tyrosylprotein Sulfotransferase 2（TPST2): is a member of the protein sulfotransferase family。 TPST2 is a widely expressed protein， which catalyzes the O-sulfation of tyrosine residues within acidic regions of proteins。 The TPST2 protein is a type II integral membrane protein located in the Golgi body。
文献导读
文章前提，FGFR4上rs351855突变在各种肿瘤中普遍存在，在肿瘤病患中占到接近50%，所以这个SNP是非常重要的，值得研究的。于是作者构建了这个突变的Knock-in小鼠。
C图告诉我们他们做成了这个小鼠，而且MEF细胞有表型，但是呢，FGFR4的表达没有变，与增殖相关的ERK信号通路也没有影响，看来存在其他通路影响细胞的增殖。于是乎，为了研究这些问题，作者开始了他的“炒作”。下面我们来讲第一张图。
图 1
作者拿WT小鼠的MEF细胞和突变小鼠的MEF细胞作比较，发现细胞表面的FGFR4表达降低，BiP/GRP78和 Sulfo-tyrosine表达升高，这说明FGFR4蛋白折叠出现了问题，FGFR4并没有形成跨膜，而是滞留在了内质网和高尔基体中。可见这个位点的重要性。
图 2
拿到这个数据以后，作者发现这个位点位于跨膜区域，Gly变成了带正电的Arg，会不会将R之后的氨基酸锁在外面了，于是作者运用了生物信息学，拓扑异构学等分析，得出了下图，突变成R以后，R之后的氨基酸序列就暴露出来进入了胞质，但这有什么意义呢？于是乎，作者要”炒作”的概念出来了，明星分子的docking site出来了---YXXQ/C。
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这个位点是STAT3的结合位点，那么检测一下STAT3的磷酸化呗（在这提醒大家，并非所有的蛋白磷酸化形式都是蛋白的活化形式，比如糖原合酶）。
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看STAT3的磷酸化的确增强了，虽然不是那么明显，虽然质量不是很好，但是人家还是发了Nature。后来，作者又做了STAT3启动子的双荧光检测，以及RNAi FGFR4之后看STAT3的磷酸化程度，是不是觉得又不是很明显，别往心里去，告诉你了这是赤裸裸地“炒作”。
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第一张图我们看到了STAT3的磷酸化在突变的MEF细胞里增强，现在我们要看的第二张图就是二者是否有直接的结合，看蛋白相互作用的方法有很多，IP免疫共沉淀就是其中一种。
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用pSTAT3的抗体去IP，转染了突变FGFR4质粒的细胞，FGFR4的确多了那么一些，好像能说明一些问题，但又好像没说到什么，请忽略图片的质量，我们只要关心概念的“炒作”。后面跟着的质谱图检测到了Y 磷酸化，这进一步加强了概念的可信度，因为STAT3对YXXQ的结合需要Y的磷酸化。知道放这些WB图和柱状图不能取信于你，于是作者用了更直接的方法，免疫荧光法。
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作者构建了4个肽段，前面接了Biotin，后面跟着是跨膜的氨基酸，然后是YXXQ或者YXXR，MST1R作为Control出现，当YXXQ变成YXXR时，STAT3便不能结合到这个区域，不能完成下游的激活。
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MST1R中，YXXR没有二者的共定位，YXXQ的在细胞膜和细胞核上都有共定位，同理FGFR4也是如此。WB检测可以看到tm.388R的STAT3的确高了，作者还检测到了EGFR，那是不是EGFR也有作用呢？
作者证明了388位点的变化，使得YXXQ的位点暴露出来，STAT3确实能够结合上去，那么STAT3的招募是不是高效呢？哪一种方式更高效呢？我的问题是这个图有没有必要做呢，咱们继续看第三个图。
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作者改造了STAT3，在N端和C端分别添加了不同的序列。N1为豆蔻酰化序列，N2突变后丧失活性的豆蔻酰化序列，C1法尼基化序列，C2突变后丧失活性的法尼基化序列，C3棕榈酰化序列，这些序列的作用都是能够引导STAT3靠向近膜端。
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检测STAT3磷酸化程度，N端的豆蔻酰化的提升最强，这时候作者把EGFR拉来了，说这种靶向作用是EGFR依赖性的，算是把第二张图的问题给解释了。作者又做了核、质、膜分离检测，核和膜的STAT3磷酸化都进一步的增强。
体外实验做到这了，得做点体内的实验了。
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作者检测了不同器官中的STAT3磷酸化程度，突变小鼠的不出意外地提高了，组织内的FGFR4的表达也不出意外的一致。再看c,d两图，小鼠肺癌模型和乳腺癌模型，STAT3磷酸化程度都有所提高。e,f图Ki67+ 染色结果，突变小鼠的组织更加恶性。
到此为止，文章就算结束了，当然遗留下了很多问题。文章既然能发Nature自然有其理由，除了文章的作者是个大牛以外，无外乎炒作了STAT3 binding cite的这个概念，G-A突变造成了跨膜域的变化，YXXQ位点暴露出来，都是已知的东西，却只有作者辗转腾挪出来，最后发表了高分文章。
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