Western Blot遇到黑点, 就像白皙的肌肤沾上了灰尘，少了那么一点美感，但不难解决，只要掌握3个关键， 立马还你个漂亮WB。
解决方案：
ⓐ确认牛奶完全溶解：
出现黑点最常发生的原因是牛奶没有完全溶解, 建议加入搅拌子，增加搅拌时间，或是溶解后离心取上清液使用。
ⓑ0.45um滤纸过滤溶液：
用0.45 um 滤纸过滤BSA或使用实验级别滤纸过滤牛奶。也可使用商品化试剂，如GeneTex的Trident Universal Protein Blocking Reagent (GTX30964,适用于WB,IHC, ICC/IF, ELISA)。
ⓒ改变缓冲液：
脱脂牛奶价钱便宜是封闭液的首选，如效果不好可换为成分单一的BSA或Casein。
解决方案：
使用现配的溶液 (Running/transfer/blocking/wash buffers)：使用现配或商业化的溶液减少因长菌长霉造成的黑点。
解决方案：
一般脱脂牛奶中含有casein这种磷酸蛋白，可能会与磷酸化抗体产生非特异性结合，因此，如使用磷酸化抗体，建议用BSA作为封闭溶液，同时洗脱溶液也用TBST，如此可降低黑点高背景值状况。
1.TBST是以Tris为基底，PBST是以磷酸盐为基底的缓冲液，一般可以根据习惯选择TBST或PBST使用，如果是操作phospho-antibody或是最终显色分析是用alkaline phosphatase (AP)系统时，因为PBST中的磷酸根会干扰，可能造成高背景值或无讯号，建议使用TBST缓冲液，另外，一次的实验中请用一种缓冲系统，不可blocking buffer用PBST，wash buffer用TBST。
2.封闭时一般使用3-5%封闭溶液, 依实验特性不同, 可做微调；牛奶与BSA的选择也是相同, 掌握原则后, 再依实验特性做微调，就能快速上手。
星狮表示：有了以上解析，图就美了呢（撒花~)
一图就懂 打包带走↓
WB黑点有点丑, 狮编解惑唱一首,
牛奶溶解要够久, 溶液现配赶菌走,
交互作用能看懂，实验成功发Nature～
来源： 小星狮谈科研微信公众号
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