摘要

小配体-受体相互作用是生物学中许多基本过程的基础，也是医学上对人类疾病进行药物干预的基础。我们在此报道了一种遗传系统，称为酵母三杂交系统，用于检测体内配体-受体的相互作用。该系统改编自酵母双杂交系统，其中结合了第三种合成杂交配体，以地塞米松和FK506共价连接的异源二聚体作为杂合配体，验证了该系统的可行性。表达大鼠糖皮质激素受体激素结合域与LexA DNA结合域的融合蛋白和FKBP12与转录激活域的融合蛋白，当接种在含有地塞米松-FK506异源二聚体的培养基上时，会激活报告基因。过量的FK506以竞争方式完全消除了报告基因激活。使用这个系统，我们在酵母中筛选了一个Jurkat cDNA文库，该文库与酵母中的转录激活域融合，在地塞米松-FK506异源二聚体存在下表达大鼠糖皮质激素受体-LexA DNA结合域融合蛋白的激素结合域。此外，我们分离了人类FKBP12的重叠克隆。这些结果表明，三杂交系统可用于发现小配体的受体并筛选已知受体的新配体。

原文链接A three-hybrid system for detecting small ligand–protein receptor interactions

阅读初衷

这篇文章发得比较早，于1996年发表于PNAS杂志上，只要经典，再早的文献都有参考价值。最近有个蛋白复合物需要做酵母双杂验证其作用，但结果是未发现其两两相互作用，所以想弄个检测三个蛋白相互作用的系统，然后我老师推荐了解这篇文献，并帮忙咨询拿到了关键质粒（pBridge）。本人饶有兴致细细品读，准备设计实验，争取把结果做出来，然而最后发现该套系统好像不是很适合我的研究目的。

文章大意

细品之后发现该系统主要是做配体与受体之间相互作用的，对于药理研究可能非常有用。之所以说是三杂，可以将该系统分为3个部分：HooK、Bait和Fish。这篇文章的验证实验设计如下：

HooK为糖皮质激素受体（rGR），当然也做了变体对其效率进行分析。Bait中的A为rGR配体(地塞米松)；B为FK506(免疫抑制剂)。Fish为FK506受体（FKBP）。通过实验设计我们可以发现，该系统甚至可以研究4种蛋白的相互作用，挺强大的。该系统推荐做激素和药物等研究的同学使用。

图1 酵母三杂工作原理

文章译本

为了方便大家以及自己日后学习，在此提供本文的全译文档。

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