基本流程
10×genomics平台能够一次性分离并标记500-1000个单细胞,并能在单细胞水平进行检测。具体是这样的:1、通过微流控系统,将单个细胞分子快速分配到油包水的微反应体系中,在这个体系中DNA分子会获得唯一的特异性分子标签(UMI)。在这个油包水体系里进行cDNA的扩增。2、然后细胞破碎,以cDNA为模板进行PCR扩增。3、然后制备生成的测序文库可以在illumina平台进行测序。3、然后可用cellranger等软件直接对illumina产生的数据进行分析。
10×barcode gel beads
10×标记的凝胶微珠,携带了UMI和barcode,能和单细胞结合形成GEMs。该10×genomics系统有350万种Barcoded beads,100万种UMI序列。测序后,barcode标记细胞(这就实现了单个细胞测序),UMI标记转录本并用于后续定量(避免了PCR可能带来的偏好性)。
UMI
unique Molecular Identifier,用来标记转录本
PolyT
用来捕获成熟的RNA
GEMs
包含了4部分,1是与illumina平台结合的Read1的引物,2是10×barcode(1个细胞中是一种标签),3是UMI用来标记转录本的(1个RNA片段是1种标签),4是Poly(dT)VN用来捕获成熟的RNA,跟mRNA的Poly尾结合。
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