电转染与细胞毒性小知识

作者: 实验小助手 | 来源:发表于2024-01-21 10:33 被阅读0次

童鞋们在进行电转过程中，会遇到细胞电击后出现的死亡现象，细胞死亡很正常，但是如果死亡率太高，那就比较头疼呢，本文为大家整理了一些小窍门，可以让亲们少走些弯路。

1）必需基因被干扰与细胞毒性：电转染实验时，如果用于电转染的siRNA直接作用于细胞必需的基因，则可能由于基因的敲降而导致细胞毒性。这时可以设置阴性对照组实验，比较阴性siRNA对照组和被敲降基因组的细胞毒性水平。

2）细胞形态改变与细胞毒性：电转染实验时，支原体污染可改变细胞形态，导致细胞毒性，影响电转染效率。检查细胞是否存在支原体污染。可使用新鲜冷冻的细胞或适当的抗生素清除支原体。

3）脉冲强度过高和细胞毒性: 电转染实验时，电穿孔的脉冲强度过高可能会导致细胞毒性，这时可以以10 V的梯度降低电压和/或以100μF的梯度降低电容。

4）电转染时的质粒DNA与细胞毒性: 电转染实验时，如果质粒DNA含有内毒素，则会导致细胞毒性。应使用高纯度、无菌、无内毒素和无污染的DNA进行电穿孔。使用氯化铯梯度或阴离子交换纯化的DNA。

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