用打孔器从消毒叶片上取得叶圆片(即叶盘)，在农杆菌的菌液中浸数秒钟后，置于培养基上共培养2~3天，待菌株在叶盘周围生长至肉眼可见菌落时再转移到含有抑菌剂的培养基中除去农杆菌，同时在培养基中加入抗生素进行转化体选择，经过3~4周培养可获得转化的再生植株的技术。
植物细胞利用Ti 转化常用的方法为叶盘法。叶盘法是一种简单易行的植物细胞转化、选择与再生的方法。
具体做法是: 先将实验材料(如烟草)的叶子表面进行消毒，再用消毒过的不锈钢打孔器从叶子上取下圆形小片，即叶盘。为了对叶盘进行接种处理，需将它放在土壤农癌杆菌培养液中浸泡4~ 5min,然后用滤纸吸干，放在看护培养基上进行培养，注意需将叶子背面接触培养基。所谓看护培养基，是特定的固体培养基上均匀分布一层胡萝卜细胞或其他细胞的悬浮液，然后覆盖一层滤纸即成。叶盘在看护培养基上培养两天后，转移到含有适当抗生素的选择培养基上进行培养。经过数周后，叶盘周围会长出愈伤组织并分化出幼苗。对这些幼苗的进一步检测(如测胭脂碱，用Southern 印迹法、Northern 印迹法、免疫分析法等) 可以确定它们是否含外源基因以及外源基因的表达情况。
用打孔器从消毒叶片上取得叶圆片(即叶盘)，在农杆菌的菌液中浸数秒钟后，置于培养基上共培养2~3天，待菌株在叶盘周围...
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本文标题：叶盘转化法
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