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实验复盘㈦----农杆菌介导转化P.expansum

实验复盘㈦----农杆菌介导转化P.expansum

作者: Han_zh | 来源:发表于2020-07-18 19:08 被阅读0次

prepare:
LB液体培养基
IM(Induction Medium)液体 & 固体培养基
CYA(Czapek yeast extract agar medium)固体培养基
MES,乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)
Rif,Kana,潮霉素B,羧苄青霉素钠
28℃、220rpm摇床,离心机,96孔板,50mL灭菌锥形瓶,10/1.5mLtube
P.expansum 孢子悬浮液,灭菌玻璃纸

一、农杆菌介导转化P.e的方法

  • 农杆菌准备与预培养
  • 青霉孢子准备与预培养
  • 青霉与农杆菌共培养44h
LB液体培养基+ Rif + Kana后挑取单菌落-Yellow.jpg 10h时的菌液-紫色.jpg
24h时菌液-Yellow.jpg
P.e预培养4h.jpg

二、影响转化效率的因素:
⒈共培养材料:以不萌发的新鲜孢子为转化材料
⒉共培养时间:100 μL∶100 μL 的比例混合,锡箔纸包住44h
⒊共培养温度:22℃
⒋诱导剂As浓度:200μM
⒌农杆菌共培养时的OD600
⒍培养基的pH

图片来自文献.png

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