2021-02-27 RNA m3C 测序技术——HAC-seq

        RNA修饰，尤其是可逆的RNA修饰赋予了RNA活性与功能调控的新方式。其中m3C就是一类位于tRNA 32位（反密码子环）和可变环的，由METTL2A/2B/6/8催化合成，ALKBH3擦除的可逆RNA修饰。tRNA C32为m3C修饰可能对tRNA高级结构的稳定以及解码的准确性有重要作用。本研究基于m3C特殊的化学性质，开发m3C特异且单碱基分辨率的Hydrazine-Aniline Cleavage sequencing (HAC-seq)技术。

三言两语

1. HAC-seq技术原理：m3C修饰RNA在Hydrazine-Aniline作用下，在修饰位点发生切割，联合基于接头连接的小RNA建库技术，可以确定发生切割的位点，即能推断修饰位点。

2. 针对rRNA去除后的总RNA的HAC-seq分析发现，m3C主要分布在tRNA上，包括11个细胞质tRNA和2个线粒体tRNA。

3. 并未在mRNA和其他类型ncRNA上发现m3C的存在，这与早期基于LC-MS研究发现mRNA上存在m3C结果不一致。

Reference

Cui, J., Liu, Q., Sendinc, E., Shi, Y. & Gregory, R. I. Nucleotide resolution profiling of m3C RNA modification by HAC-seq. Nucleic Acids Res (2020).