G1/S check point:静止进入dna合成期,检验基因有损伤,是否进入
G2/M checkpoint: 是否一分为二
- 每样本 500μl 工作液孵育;临用前将 Rnase A:PI 工作液按 1:9 体积配制成染色工作液。
- 用 PBS 洗涤细胞一次(离心 2000rpm,5min)收集并调整细胞浓度为 1×10^6/ml,取 1ml 单细胞悬液;
- 制备的单细胞悬液离心后,去除上清,在细胞中加入体积分数为 70%冷乙醇 500ul (乙醇加入量可以更多)固定(2 小时至过夜,可以更久),4℃保存,需要吹打!
- 再离心,去除上清 1000rpm,3min;
- 加入1ml PBS重悬细胞沉淀, 1500rpm离心5min,弃上清
- 加入提前配制好的 500μL PI/RNase A 染色工作液,室温避光 30-60min;
- 上机检测,需要滤纸,上机前吹打。记录激发波长 488nm 处红色荧光
- 流式图结果解读:
右边的那一组数据的解读如下:
Dip G1:73.32% at 49.57,代表G1期DNA含量平均值为49.57,73.32%是G1期细胞数目占总数目的73.32%,这个时候根据下方的All cycle events,就可以算出具体的数值。
Dip G2:9.58% at 99.15,代表G2期DNA含量平均值为99.15,9.58%是代表G2期细胞数目占总数目的9.58%。
以此类推。。。。。。
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