陈巍学基因视频学习笔记--视频11：单细胞mRNA测序

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陈巍学基因视频学习笔记--视频8：外显子测序
陈巍学基因视频学习笔记--视频9：small RNA-seq
陈巍学基因视频学习笔记--视频10：单细胞DNA测序

单细胞mRNA遇到的困难：

（1）单细胞mRNA的量非常少，只有0.2 pg，需要的扩增倍数非常大，很难控制均已覆盖；
（2）建库的时候如何尽可能的扩增mRNA，尽量减少其他RNA的干扰。

解决问题：

1. SMART

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详细介绍

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之后就是常规的建库即可
方法的巧妙点：
（1）定位引物，保证逆转录的位置，合成出来的cDNA之后连上通用引物；
（2）利用MMLV逆转录酶加C碱基的作用，再用有3个碱基的上游引物进行第二链的合成，保证了只有完整的第一链cDNA才能被合成出cDNA的第二链，保证了双链cDNA是全长的；
（3）保证PCR扩增的一致性，因为cDNA的5’和3’都引入了一样的引物，从而保证了PCR扩增效率的一致性。
建库测序情况如下

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2. TargetAmp

第一链cDNA

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第二链cDNA

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巧妙之处：
不用PCR，用转录的方法得到文库，统一T7启动子，保证了扩增效率的均一性，一方面保证了量，另一方面保证了扩增效率的一致性。