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一篇文章详解:甲基化(WGBS)数据分析加速

一篇文章详解:甲基化(WGBS)数据分析加速

作者: chSNP | 来源:发表于2023-04-12 16:34 被阅读0次

    全基因组甲基化测序(WGBS)是一种研究DNA甲基化的方法,以全面了解在基因组水平上的表观遗传变化。在进行WGBS数据分析时,通常需要使用专门的比对工具,因为这些工具需要能够处理亚硫酸盐转化后的数据。

    以下是四个不同的WGBS比对分析流程:

    • Bismark:Bismark是一个基于Bowtie2或HISAT2比对器的流行WGBS分析工具。它允许处理双链亚硫酸盐转化测序数据,并提供甲基化位点的检测和分析。
    • BitmapperBS:BitmapperBS是一个专门为亚硫酸盐转化测序数据设计的高效比对器。它可以处理双链测序数据,并提供甲基化位点的检测和分析功能。
    • BSseeker2:BSseeker2是一个用于WGBS数据分析的比对工具。它可以处理单链和双链亚硫酸盐转化测序数据,并支持Bowtie, Bowtie2和SOAPaligner作为比对器。BSseeker2提供了甲基化位点检测和甲基化水平计算等功能。
    • BWA-Meth:BWA-Meth是一个基于BWA的比对工具,专门用于处理WGBS数据。它提供了处理双链亚硫酸盐转化测序数据的功能,并可以进行甲基化位点检测。
      这四种分析流程各自具有不同的特点和优势,选择哪个流程取决于研究需求、计算资源以及期望的分析速度和准确性。实际应用中,可以尝试比较这些流程的结果,以找到最适合您需求的解决方案。

    WGBS甲基化分析流程加速方案

    Sentieon BWA + MethyDackel
    在甲基化分析中,Sentieon软件可以与其他工具结合使用以提高分析速度和准确性。在这种情况下,Sentieon BWA被用来替换原始的BWA-mem,与MethyDackel结合,建立起Sentieon BWA-Meth流程。

    在这个流程中,Sentieon BWA首先负责处理亚硫酸盐转化后的测序数据进行高效的序列比对。由于Sentieon BWA的优化,比对速度和准确性得到了提高,同时减少了计算资源的消耗。

    接下来,MethyDackel被用于从Sentieon BWA的比对结果中提取甲基化信息。MethyDackel能够检测甲基化位点,计算甲基化水平,并生成甲基化状态的统计和可视化结果。

    通过结合Sentieon BWA和MethyDackel,Sentieon BWA-Meth流程能够为全基因组甲基化分析提供一个高效且准确的解决方案。这使得研究人员可以更快地分析甲基化数据,更有效地挖掘潜在的生物学意义。

    具体加速流程

    Sentieon处理甲基化数据的过程可以概括如下:

    1. Sentieon甲基化分析流程:


      WGBS分析流程
      • 使用EpiQC研究中的全基因组甲基化测序数据(doi:https://doi.org/10.1101/2020.12.14.421529)。
      • 数据预处理:读取修剪、质量控制。
      • 使用四种不同的分析流程进行比对,包括Bismark、BitmapperBS、BSseeker2和BWAMeth。
      • 使用Sentieon BWA替换原始的BWA-mem,并与MethyDackel结合,建立Sentieon BWAMeth流程。
      • 比对后处理:使用不同的模块进行甲基化位点调用和CpG甲基化水平识别。
    2. 甲基化映射速度比较:


      不同甲基化比对流程性能
      • 每次比较中,使用相同的随机种子对一百万对读取进行随机抽样。
      • 在24个CPU线程的服务器上使用各软件的默认参数运行比对。
      • 记录每个重复实验的性能时间。
      • Sentieon BWA-Meth比原始的BWA-Meth速度提高了2.5倍,与BitMaperBS的速度相似。
    3. 甲基化映射准确性比较:


      不同比对工具的精度比较
      • 比较不同甲基组文库制备中的流程映射准确性;使用Samtools stats和Qualimap生成后比对统计数据。
      • 显示库总读取的参考映射结果分布。
      • Sentieon BWA-meth具有最高的主要映射率和最低的未映射率。
    4. CpG位点读取覆盖率比较:


      不同工具的CpG位点读取覆盖率比较
      • 计算14个库和4个分析流程中识别出的CpG位点的测序覆盖率。
      • 与其他测试工具相比,Sentieon BWA-Meth在CpG位点提供了更高的测序覆盖率。
    5. Sentieon甲基化分析流程结论:

      • Sentieon BWA-Meth与BWA-Meth提供相同的结果。
      • Sentieon BWA-Meth流程显示出最高的处理速度,比开源流程快约2倍。
      • Sentieon BWA-Meth具有最高的主要映射率和最高的CpG位点读取覆盖率。
    6. 应用说明 - 安装

      • 安装bwa-meth
    # Prerequisites: samtools # these 4 lines are only needed if you don't have toolshed installed 
    wget https://pypi.python.org/packages/source/t/toolshed/toolshed-0.4.0.tar.gz 
    tar xzvf toolshed-0.4.0.tar.gz 
    cd toolshed-0.4.0 sudo 
    python setup.py install
    
    wget https://github.com/brentp/bwa-meth/archive/master.zip 
    unzip master.zip 
    cd bwa-meth-master
    sudo python setup.py install
    
    • 安装MethylDackel
    # Prerequisites: htslib and libBigWig
    git clone https://github.com/dpryan79/MethylDackel.git 
    cd MethylDackel 
    make LIBBIGWIG="/some/path/to/libBigWig.a" 
    make install prefix=/some/installation/path
    
    • 安装BWA(开源)
    # Only used for indexing reference genome. 
    git clone https://github.com/lh3/bwa.git 
    cd bwa; make
    
    1. 准备测试数据

      • 从bwa-meth下载测试数据并使用开源BWA对参考基因组进行索引。
    wget https://github.com/brentp/bwa-meth/raw/master/example/ref.fa 
    wget https://github.com/brentp/bwa-meth/raw/master/example/t_R1.fastq.gz 
    wget https://github.com/brentp/bwa-meth/raw/master/example/t_R2.fastq.gz
    
    • 使用开源BWA构建index索引
    bwameth.py index $REF #Indexes with BWA-MEM (default)
    
    • 确保安装了开源的BWA在$PATH下,而不是Sentieon BWA


      image.png
    1. 读取比对:

      • 使用Sentieon BWA进行读取比对。

      • 将Sentieon bin文件夹添加到$PATH。

    export PATH=<PATH_TO_SENTIEON>/sentieon-genomics-202112.05/bin:$PATH
    
    *   运行bwa-meth,通过sentieon util sort进行排序。 
    
    bwameth.py --threads 16 \
            --reference $REFERENCE \
            $FQ1 $FQ2 | \
    sentieon util sort -i - –sam2bam –o output.bam
    
    • 确保屏幕输出以下内容。否则,bwa-meth将使用开源bwa。
    This software is licensed to [xxxxx@xxxx.xxx] by Sentieon Inc. 
    version: sentieon-genomics-202112.06
    
    image.png
    1. 制表:

      • 使用开源工具MethylDackel。
    MethylDackel extract ref.fa output.bam
    
    image.png
    • 输出结果为bedGraph文件,第4列表示在给定位置有甲基化C的证据的读取/读取对数,第5列表示未甲基化C的等价值。


      image.png

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