编者：托马斯林 医学博士
卵子 生殖干细胞 生殖细胞 iPSC
卵子是在卵巢中产生的。女性在胚胎期约3~6孕周时即已形成卵巢的雏形。出生前，卵巢中会形成数百万个初级卵母细胞，经过儿童期、青春期，到成年就只剩10万多个初级卵母细胞。初级卵母细胞包裹在原始卵泡中，在性激素的影响下，每月产生一个原始卵泡成熟，成熟的卵子再从卵巢排出到输卵管。一般来讲，女性一生成熟的卵子约为300~400个。
对于健康女性来说，一生中成熟的卵子足矣，但对于因卵子原因不孕的女性来说就是无法逾越的障碍，因此对于体外成熟或者诱导形成卵子技术就很重要了。
2007年，日本京都大学山中伸弥教授的团队首次通过转基因技术，将这4个关键多能基因导入人上皮纤维母细胞诱导生成人诱导多能干细胞（iPSCs），随后，科学界利用iPS技术定向诱导分化形成不同的细胞。
2013年，Niu等建立了iPSCs系，它可以在悬浮培养3天后自发分化为胚胎体(EBs)，表达了三个胚层的特定标记。然后用维甲酸(RA)和猪卵泡液(PFF)分化培养基或输精管移植中培养粘附的EBs，诱导iPSCs分化成生殖细胞。结果表明，RA和PFF有利于诱导iPSCs向生殖细胞和卵母细胞样细胞的产生。
首先他们先确定该ipSCs细胞系没有发生任何的变异或者突变，处于稳定传代的过程中。
其次，将该ipSCs细胞系通过悬浮培养3天，并自发形成了胚胎体，该胚胎体能够表达三个胚层的特别标记，说明该ipSCs细胞系具有多分化潜能。
随后，他们将iPSCs细胞系移植到受体小鼠肾包膜下4周，形成了畸胎瘤，一些畸胎瘤细胞分化成圆形的细胞，被认为是类生殖细胞，通过免疫荧光染色表达生殖细胞和减数分裂的标记，包括Oct4、Dazl、Vasa、Stra8、Scp3。有些细胞还阳性表达精子标记物Acr和卵母细胞标记物Zp3部分细胞呈阳性。
最后，他们在RA和10% PFF培养基中培养iPSCs分化成生殖细胞。第3天，iPSCs形成的胚胎体连接在塑料板上，胚胎体的外围细胞形成单层膜，继续在胚胎体中心周围扩散一些大细胞和小簇。到第7天，分化形成一些类似早期生殖细胞群的大细胞群。这些结构似乎包含原发性卵泡状细胞，类似于发育阶段的卵母细胞的大小和结构。免疫荧光分析显示卵母细胞样细胞表达生殖细胞标记物Vasa、减数分裂特异性基因Dazl、Stra8、Scp3和卵母细胞标记物Zp3。这些结果表明，RA和PFF有利于从iPSC中衍生生殖细胞和卵母细胞样细胞。
以上，说明iPSCs细胞在合适的条件下能够衍生卵母样细胞，为进一步生成成熟的卵子，并为以后的应用提供理论基础。
No.BNC-GW20180023自体干细胞讲堂
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