一、什么是融合表达?
通过基因构建,将两个独立蛋白的编码基因变成一个完整的阅读框,在表达过程中,宿主会将这两个基因当作一个融合基因,从而表达出一个完整的大蛋白。
二、利用GFP融合蛋白法进行蛋白质亚细胞定位
Prepare:
pC-NEO载体-- 平板划线法培养大肠杆菌细胞 →大提质粒
引物设计(46bp)-- 20bp载体序列+6bp酶切位点+目的基因前20bp序列
提取WT菌株的RNA并反转录成cDNA
限制性内切酶SacⅠ、XbaⅠ双酶切载体
Sac I酶切序列.png
Xba I酶切序列.png NEO载体图谱.png
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