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软件14 —— IGV

软件14 —— IGV

作者: 果蝇饲养员的生信笔记 | 来源:发表于2023-07-19 00:02 被阅读0次

    一、 基本介绍

    IGV(Integrative Genomics Viewer)是一款本地即可使用的基因组浏览器。支持BAM、SAM、GOBY、VCF、PSL、BED、TDF等格式。

    目前支持的格式包括:

    • 序列比对:bam、cram
    • 基因组注释:bed、gtf、gff3、psl、bigbed
    • 信号数据:wig、bedgraph、bigwig、tdf
    • 拷贝数:seg

    二、 使用方法

    (1) 安装IGV

    安装IGV注意事项:不要安装在有空格的文件夹下;IGV需要java,可以先安装java在默认位置,然后安装IGV。

    (2) 导入文件

    • 导入参考基因组fa文件(Genomes -> Load Genomes From Files),一定要是fa文件。可能需要索引:samtools faidx input.fa。
    • 导入gtf注释(Tools -> Run igvtools -> commond=sort, input file=gtf, Run ->> File -> Load from file ->> GO-index)。
    • 导入bam或bw文件(File -> Load from File),bam一定要sort,同时在bam文件所在的目录下一定要有bam文件对应的.bai索引文件。
    • 选择感兴趣的染色体,或者输入感兴趣的基因组位置(格式:染色体:起始位置-终止位置)。
    • 修改显示格式。在测序深度区域或者read覆盖区域单击右键,会弹出一个下拉菜单。右键单击选择Save image。

    (3) 查看BAM文件

    载入bam文件后会产生3个相关的tracks,一般情况下,前两个tracks会自动出现。这些设置可以通过右键进行修改。

    • Alignment track:显示每个的reads的比对情况。
    • Coverage track:显示覆盖率和测序深度。
    • Splice Junction Track:提供一个可选的横跨剪切位点(spanning splice junctions)的reads视图。

    Coverage Track:默认情况下,IGV能动态计算和显示比对文件的覆盖率和测序深度。当IGV窗口放大到reads 可视化阈值大小(默认为30KB)时,这个track会以灰色条形图显示每个位点的测序深度。如果某核苷酸与参考序列不同(超过20% reads)时,IGV会标出不同的颜色。A→绿色;C→蓝色;G→橙色;T→红色。将鼠标悬停在你需要查看的位点处可以看到详细的信息,右键可以复制。

    Alignment Track:当IGV窗口放大到30KB(默认)时,就会显示出各个reads的情况。当窗口放大到一定程度时,IGV的窗口中心会出现一条线,再继续放大,中心线会变为两条,刚好可以框住一个碱基。IGV使用reads透明度来表示其质量。灰色表示和参考基因能比对上的reads。注意:那些透明或者白色的reads有着亮灰色边框的其比对质量(MQ)为0。

    结构变异(Structural Variants):IGV使用颜色和其他的标记来显示变异,如SNP、SV、aneuploidy。紫色(I):插入,鼠标悬空在此处能显示插入的碱基信息。黑色横线(-):缺失。

    可通过 View >>Preferences >>Alignments 面板设置相关参数。默认情况下 Track Alignments 区以紧凑的单个 reads 的形式展示,通过 View as pairs 可成对显示,且中间以细线连接。Sort alignments by 可对Track区域进行排序,如想返回最初结果则选择 Re-pack alignments 即可。

    (3) 查看BW和Bedgraph文件

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