IGV 杂记

作者: ytbao | 来源:发表于2021-10-31 09:16 被阅读0次

        网页在线版 https://igv.org/app/

        本地安装,下载网址:http://software.broadinstitute.org/software/igv/download (有Windows,MAC,Linux系统对应的版本)

    下这种带JAVA的,省事

    本地版

    数据导入

        参考基因组:导入fasta文件(Genomes-load genome from file),需要把索引文件一起导入;或 Genomes-load genome from Server下载参考基因组

        File-load from  file,输入的文件格式支持:

        bam/sam文件(比对,bam文件是经过sort了的,bam文件需要索引文件, bai或csi索引文件必须和bam放在同一个文件夹中,但是导入的时候,只需要导入bam即可)(建索引:bai:samtools index xx.bam;csi:samtools index -c xx.bam),TDF文件(bam精简版,只包括局部深度、正负链等信息,可用IGV tools转化为TDF);

        bed文件(注释文件,基因的,转座子的等);

        gtf/gff文件(注释文件,经过sort的,sort可以通过IGV自带的工具转换,Tools Run Igvtools);

        ATAC-seq的bw文件,peaks.narrowPeak文件;

        PSL文件(Blast比对结果),VCF文件(SNP,indel等信息),IGV文件(IGV默认的格式)等来可视化

        搜索框可以同时输入好几个位置信息或者基因名,Go后可以同时显示。

        在轨迹信息栏和基因窗口都可以右键呼出如下菜单栏:

    我输进去的bam的bw格式文件能显示上图类型,bam格式文件显示的没那么多。图自https://cloud.tencent.com/developer/article/1872201?from=article.detail.1858743    王诗翔

        右击track设置颜色、高度、呈现形式(热图,柱形图)、取值方式(标准化,均值等)等属性;AutoScale是否自动缩放(根据不同区域的深度情况自动调整深度范围);log scale为标准化了数据。

    bam文件

        当加载一个bam文件时,一般会创建三个相关的tracks:http://software.broadinstitute.org/software/igv/alignmentdata

    Alignment Track 对每个比对的reads进行可视化

    Coverage Track 对测序深度和覆盖度进行可视化

    Splice Junction Track 对可变剪切位点进行可视化

    默认仅显示Alignment Track和Coverage Track,可以在track这里右键设置是否显示这几个track

        “Collapsed 折叠” ,“Expanded 扩展”, “Squished 扁平化”

       当导入bw文件时只有Coverage track的内容,为read的覆盖深度,想看read的比对信息还要用bam文件。

        覆盖度栏(Coverage Track): 用于直接展示reads 的丰度,高度代表比对到此处read数目。

        Reads栏(Reads Track): 主要用于直接展示reads的比对情况。选择 Expanded(Show mismatched bases);当比对到参考基因组上的测序片段中有超过20%与参考基因组不同时,就用不同的颜色标注,红色-T,蓝色-C,绿色-A,橙色-G。否则默认条件下用灰色标注。在更高的分辨率下,可以查看每个碱基下覆盖的各种碱基的数目及比例。选择Color alignment by-Read strand,可将read分为左右两端查看。reads较多可以Sort alignment by或者Group alignment by进行排序和分区查看。

    https://mp.weixin.qq.com/s/r6p1IvjBJjd2WTNUPQCZuQ    生信星球 https://mp.weixin.qq.com/s/r6p1IvjBJjd2WTNUPQCZuQ    生信星球

    插入,缺失,SNP转换颠换,重复等

        插入 用紫色的 I 或红色的 I (当插入的碱基数多余预设的阀值时)表示;鼠标停留能查看详细的插入碱基情况

    https://www.jianshu.com/p/5477dd408146 Sc_RNA_seq https://www.jianshu.com/p/4089d07ba239 shannonnana

    Splice Junction Track:Junction 来自于正链用红色表示,来自于负链使用蓝色表示。

    对于RNA_seq的数据,由于内含子的存在,reads比对到基因组上,是需要跳过内含子区的,splice junction track用曲线将外显子边界连接起来。

    https://www.jianshu.com/p/4089d07ba239 shannonnana

    IGV自带的igvtools工具使用

    基因是用线和条形描绘的

        横线表示内含子区域,竖条表示外显子区域,箭头表示基因转录的方向或者说转录的链。内部的竖条表示外显子的CDS区域,两端的竖条是UTR。图中表示的是5’到3‘方向,基因在正链,5’UTR在左侧,3‘UTR在右侧。基因颜色可以设置:右键track名字,change track color

        外显子与内含子的邻接部位是一段高度保守的序列:外显子尾巴与下一个内含子的头部多数是GT,内含子的尾巴与下一个外显子的头部多数是AG,可以简单记做GT-AG法则,作为RNA剪切的识别信号


    为检索区域添加书签

        Regions-Region Navigator,当进行全局浏览时,可以边看边点击add 来添加。查看某个标签点 view

    50-100 kb查看局部信息,如基因表达,突变等,500bp可查看单碱基水平的情况。

    网页在线版

        Genome 选项,从本地导入自己物种的参考基因组,需要把索引文件一起导入

        Tracks 选项,可以根据自己的需求,导入文件可视化。

     四个样本的bw文件,这里"峰"的高低,代表有多少条序列回帖比对到这个位置上。     Coverage track,上面灰色柱,表示的是该样品在基因组上的覆盖度,横坐标是基因组位置,纵坐标则是该位置上的测序深度。下面对应的是该样品比对到参考基因组上read的track,每一条代表一个read,可以通过讲鼠标的光标移动到read位置,就可以显示比对详情,也可以直观的看到每个碱基是什么。当导入bw文件时只有Coverage track的内容,为read的覆盖深度,想看read的比对信息还要用bam文件。上图覆盖度纵坐标没有自动缩

        覆盖度栏(Coverage Track): 用于直接展示reads 的丰度,高度代表比对到此处read数目,当比对到参考基因组上的测序片段中有超过20%与参考基因组不同时,就用不同的颜色标注,红色-T,蓝色-C,绿色-A,橙色-G。否则就用灰色标注。在更高的分辨率下,可以查看每个碱基下覆盖的各种碱基的数目及比例。AutoScale是否自动缩放(根据不同区域的深度情况自动调整深度范围)

        Reads栏(Reads Track): 主要用于直接展示reads的比对情况。选择Color alignment by-Read strand,可将read分为左右两端查看。

    挺多其他还没用到的小细节还没学


    声明:本篇多为资料整理总结,仅用于自学记录,侵删,谢谢。感谢作者大大们分享:

    刘小泽    https://www.jianshu.com/p/9221ce6c5092

    生信星球    https://mp.weixin.qq.com/s/r6p1IvjBJjd2WTNUPQCZuQ

    shannonnana    https://www.jianshu.com/p/4089d07ba239

    Sc_RNA_seq https://www.jianshu.com/p/5477dd408146

    王诗翔    https://cloud.tencent.com/developer/article/1872201?from=article.detail.1858743

    东风008    https://www.jianshu.com/p/256b51722f0c

    .插入:用紫色的 I 或红色的 I (当插入的碱基数多余预设的阀值时)表示;鼠标停留察看详细的插入碱基情况

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